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CFSE , ou carboxyfluorescein -succinimidyle ester, est une solution de coloration des cellules fluorescentes utilisées dans les études de la migration des lymphocytes . Les lymphocytes sont des globules blancs du sang de qui ont la capacité de se déplacer hors de la circulation sanguine pour capturer des micro-organismes étrangers , en jouant un rôle important dans le système immunitaire de défense. CFSE peut également être utilisé pour thymocytes de l'étiquette et les cellules embryonnaires , selon " immunologie et biologie cellulaire ». Lymphocyte coloration Protocole
techniciens droits de préparer une suspension cellulaire avec 20 millions de cellules par ml dans 0,1 pour cent de sérum de veau fœtal ( FBS) et tampon phosphate salin (PBS). Ils ajoutent CFSE et laissez suspension reposer pendant huit minutes , selon l'Université du Kansas Medical Center. FBS préchauffé est ensuite ajouté et les cellules sont incubées dans un bain d'eau à 98,6 degrés Fahrenheit pendant 10 minutes. Les cellules sont ensuite centrifugés pendant cinq minutes , le surnageant est éliminé et les cellules sont lavées dans une solution de 2 pour cent de FBS /PBS à trois reprises. Les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde .
Le simplifiées CFSE coloration Protocole
techniciens centrifuger les échantillons de sang , d'éliminer les globules rouges . Plus tard, ils se lavent les lymphocytes avec PBS pour éliminer la protéine libre. Pour être en mesure d'observer la division cellulaire après deux jours, CFSE est ajoutée en faibles concentrations pendant huit minutes , puis la réaction est bloquée avec du sérum de veau foetal. Les cellules sont lavées deux fois avec du PBS /FCS . Ce protocole peut être utilisé en "in vivo" ou "in vitro" des expériences , selon The Lab Hedrick à l'Université de Californie.
Protocole pour l'activation des cellules T CD8 naïves dans vitro
une cellule T naïve est un lymphocyte qui a différencié dans la moelle osseuse . Ce type de cellule est considéré comme mature, et les cellules répondent à de nouveaux agents pathogènes que le système immunitaire n'a jamais rencontrées . Techniciens incuber des échantillons de cellules virus de la grippe et sur la glace pendant 30 minutes , centrifuger et poursuivre le processus d'incubation de 18 heures à 98,6 degrés Fahrenheit. Plus tard , les cellules sont colorées avec CFSE et les résultats sont analysés sous la cytométrie de flux .
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