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Les scientifiques surveillent régulièrement la croissance cellulaire. Il peut s'agir d' une partie de l'entretien régulier de la cellule , ou dans le cadre d'une expérience. Par exemple , une expérimentation pourrait être mis en place pour comparer l'impact de trois médicaments différents sur la croissance des cellules . Dans ce cas, quatre flacons de cellules à la même concentration sont mis en place , l'un sans drogue comme un contrôle et un pour chacun des trois médicaments . Les cellules sont retirées des flacons , à intervalles réguliers , comme tous les jours , comptés et enregistrés. Les numéros de cellulaires sont reportés sur un graphique en fonction du temps , l'impact des médicaments sur la croissance cellulaire peut être comparée à la commande. Choses que vous devez
cellules en suspension
Test tubes
Pipettes
croissance à moyen
hémacytomètre
couverture glissement
Compteur à main
Objectif papier
bleu Trypan Photos Microscope
Show More Instructions
cellules
1 cellules doucement pour obtenir une suspension uniforme. Supprimer un volume de cellules, telles que 1,0 millilitre (ml) , avec une pipette et transférer dans un tube à essai . Diluer les cellules de donner 100.000 à 500.000 cellules par ml - ce qui devrait fournir les quelque 100 cellules nécessaires à la signification statistique lorsque l'on compte
2 cellules dilué, si nécessaire, en ajoutant 9,0 ml de milieu à l' . 1,0 ml de cellules . Mixer et enregistrer la dilution. Si les cellules sont encore trop concentrés , retirer 1,0 ml de cellules diluées dans un nouveau tube , ajouter 9,0 ml de milieu , mixer et enregistrer la dilution. Les cellules de mammifères se développent habituellement de l'ordre de 100.000 à 5.000.000 par ml , de sorte que 0 à 2 dilutions devraient suffire .
3 Mélanger les cellules de la dilution finale . Suppression d'un petit volume, comme 0,1 ml , et le placer dans un nouveau tube. Ajouter un volume égal de bleu trypan , mixer et enregistrer la dilution. Les cellules mortes prennent bleu trypan et n'apparaîtra bleu sous le microscope.
Comptage
4 polir les hématimètre et lamelle avec du papier de verre , et le lieu lamelle sur la grille de hemocytameter . Ajouter une goutte de cellules diluées à la V- forme à côté de la grille. Cellules se déplacent sous la lamelle par capillarité.
5 placer la lame sur microscope , se concentrer sur la grille et utiliser décompte de la main pour compter les cellules viables , et non bleus. Les cellules doivent pas se chevaucher , si elle est trop dense , effectuer une autre dilution. Si les cellules sont trop dilué, préparer un échantillon plus concentré.
6 Retirer le hémacytomètre , propre, recharger, et comptez à nouveau. Comptez chaque échantillon de cellules à trois reprises.
Calcul
7 calculer le nombre de cellules par ml . La grille de hémacytomètre est divisé en 9 grands carrés , chacune avec un volume de 0,1 ml .
8 Diviser le nombre de cellules comptées par le nombre de grands carrés utilisés (neuf si vous utilisez l' ensemble de la grille ) , et multiplier par 10.000 à obtenir des cellules par ml. Multiplier par le facteur de dilution (s) pour la concentration finale .
9 enregistrement la date, l' échantillon, le nombre de cellules , les facteurs de dilution et le nombre final de cellules par ml. Préparer un graphique du nombre de cellules en fonction du temps d'afficher une croissance cellulaire.
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